玉米赤霉烯酮完全抗原的制备及鉴定

摘要

为了降低基层检测部门检测谷物中玉米赤霉烯酮(ZEN)的成本,研制国产化检测试剂盒非常必要,而试剂盒的研制离不开完全抗原的支持.本试验的主要内容是将ZEN肟化,生成玉米赤霉烯酮肟(ZENO),再用DCC-NHS活性酯法将ZENO与牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵白蛋白(OVA)偶联合成ZEN完全抗原,最后透析将未偶联的小分子ZEN除去,得到的即为完全抗原.包被原ZEN-BSA浓度为1.62 mg·mL-1,免疫原ZEN-OVA浓度为1.33 mg·mL-1.采用UV法、SDS-PAGE法对完全抗原进行鉴定,同时建立间接ELISA方法验证包被原ZEN-BSA.结果表明:采用活性酯法合成的ZEN完全抗原在319 nm处出现新的吸收峰,且SDS-PAGE图表明ZEN-BSA分子量集中在60～70 kDa,ZEN-OVA分子量集中在40～50 kDa,不同于BSA和OVA分子量,但相差不大.根据紫外扫描图计算得到ZEN-BSA结合比为7.0:1,ZEN-OVA结合比为6.1:1.根据免疫学方法可知,OD450 nm值随着毒素浓度的增加而减小.本试验利用3种方法对ZEN完全抗原进行鉴定,证明ZEN完全抗原偶联成功.