TGF-β1对SKOV-3细胞EMT的影响及相关分子机制研究

摘要

目的 研究TGF-β1(TGF-β1)对上皮性卵巢癌SKOV-3细胞上皮间质转化(EMT)的影响及相关分子机制.方法 MTT法检测各浓度TGF-β1(1、2、5以及10 ng/ml)干预24、48 h后,SKOV-3细胞增殖所受影响(对照组TGF-β10 ng/ml);Transwell检测培养48 h后SKOV-3细胞的侵袭能力,实验分组:TGF-β1组(浓度1、2、5、10 ng/ml)、LY294002组(PI3K抑制剂,浓度10μmol/ml)、LY294002+TGF-β1组(浓度10μmol/ml+10 ng/ml)、对照组(PBS);蛋白印迹(Western blot)法检测培养48 h后各组丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B(Serine-threonine protein kinase B,p-Akt)、转录因子Twist(Transcriptional factor Twist,Twist)、神经钙黏(Nerual-cadherin,N-cadherin)蛋白及上皮钙黏(Epithelial-cadherin,E-cadherin)蛋白等的表达情况,分组如下:TGF-β1组(浓度10 ng/ml)、LY294002组(浓度10μmol/ml)、LY294002+TGF-β1组(浓度10μmol/ml+10 ng/ml)、对照组(RPMI-1640).结果 MTT:TGF-β1对SKOV-3细胞无明显促增殖作用(P>0.05);Transwell:不同浓度TGF-β1干预后SKOV-3穿过小室细胞数目多于对照组,呈浓度依赖性(P<0.05);LY294002单独或联合TGF-β1组,SKOV-3细胞运动侵袭能力均显著降低(P<0.05);Western blot:经TGF-β1干预后p-Akt、Twist、N-cadherin蛋白表达水平显著增加,E-cadherin蛋白表达水平显著降低;LY294002单独或联合TGF-β1可逆转上述蛋白的表达情况(P<0.05).结论 TGF-β1可对PI3K/Akt信号通路起激活作用,从而诱导SKOV-3细胞出现EMT,促使其侵袭转移能力增强.