侵袭转移

摘要： 卵巢癌为妇科肿瘤中的头号杀手,大部分患者早期缺乏明显症状及有效的筛查方法导致其发现较晚,预后不佳,卵巢癌患者5年生存率约为45%,中晚期患者多伴有腹水形成及化疗耐药性,这成为卵巢癌诊治中的一大难题。近年来,随着肿瘤靶向治疗领域的迅猛发展,提供给我们一种新的思路,是否可以通过免疫靶向治疗,更好的指导个体化治疗及改善卵巢癌患者的预后情况。分化簇(CDs)是不同细胞中的表面标志物,它们诱导细胞相互通讯的信号通路。最近在癌症研究中引起新兴趣的CD分子之一是CD24。CD24是一种小的重糖基化抗原,在多种癌症类型(包括卵巢癌)中过表达。CD24表达与癌细胞的发育、侵袭和转移有关。通过阅读大量文献,获悉CD24与卵巢癌发生发展及预后均有非常紧密的联系,下文将阐述CD24在卵巢癌方面的研究进展。

摘要： 目的:研究健脾化瘀解毒方的含药血清(JHJRMS)对人肺癌细胞能量代谢的影响。方法:TCGA数据库分析己糖激酶2(HK2)与肺癌患者预后之间的相关性;划痕实验用来检测JHJRMS对肺癌细胞侵袭转移的影响。RT-PCR检测JHJRMS对肺癌细胞中miR-143-3p表达水平的影响。数据库预测miR-143-3p与HK2蛋白的相关性。Western blot检测JHJRMS对肺癌细胞HK2、E-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白的影响。结果:TCGA数据库结果显示,HK2低表达,肺癌患者具有更好的预后。划痕实验结果显示JHJRMS能显著抑制肺癌细胞的侵袭转移。RT-PCR结果显示JHJRMS可明显增加肺癌细胞中miR-143-3p的表达水平。数据库结果提示,miR-143-3p和蛋白HK2的mRNA存在多处互补链,miR-143-3p可能靶向调控HK2。Western blot结果显示JHJRMS处理肺癌细胞后,细胞中的HK2、E-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低。结论:JHJRMS能明显抑制人肺癌A549细胞的侵袭转移,其机制可能是通过miR-143-3p调控HK2的表达水平直接影响细胞的能量代谢过程。

摘要： 目的:探究钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)在肺腺癌组织中的表达及其促进肺腺癌的侵袭、转移。方法:通过免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)分析肺腺癌患者的石蜡组织标本CaMKⅡ表达与临床病理参数关系,同时对肺腺癌组织与其配对淋巴结转移病灶中的CaMKⅡ表达情况进行比较分析,收集2011年1月至2011年12月于天津医科大学肿瘤医院行手术治疗的113例肺腺癌患者及21例配对的原发病灶及淋巴结转移病灶的石蜡组织标本。将肺腺癌细胞系H1299及Calu3进行慢病毒转染,实验组转染高表达CaMKⅡ病毒,对照组转染阴性对照病毒,通过Transwell实验和划痕实验检测肺腺癌细胞侵袭、转移能力,通过Western blot检测CaMKⅡ表达水平与上皮间充质转化(pithelial-mesenchymal transition,EMT)相关指标和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)通路激活间的关系。结果:CaMKⅡ高表达与肺腺癌TNM分期和淋巴结转移呈正相关,肺腺癌淋巴结转移病灶中的癌组织CaMKⅡ表达明显高于其原发病灶(P<0.05)。细胞实验表明,CaMKⅡ高表达的肺腺癌细胞,其穿膜细胞数目明显增多,伤口愈合能力增强;EGFR通路激活后p-CaMKⅡ水平增加,且CaMKⅡ促进了EMT相关蛋白及转录因子的表达。结论:CaMKⅡ参与EGFR信号传导,促进EMT过程,增加肺腺癌的侵袭转移能力。

摘要： 目的研究周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)对去势抵抗性前列腺癌细胞DU145生长及侵袭转移的影响,并初步探究其作用机制。方法采用CDK5 siRNA干扰CDK5在DU145细胞内的表达,CDK5抑制剂20-223抑制CDK5在DU145细胞内的活性;采用噻唑蓝(MTT)检测细胞生长活力,单克隆形成实验测定细胞增值能力;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双染法测定细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验测定细胞的迁移能力;Western Blot测定Myc促癌基因(c-Myc)、SRY-box转录因子4(SOX4)及侵袭转移相关蛋白的表达情况。结果抑制CDK5在DU145细胞内的表达和活性,可抑制肿瘤细胞的恶性增殖和侵袭转移(P<0.05),促进肿瘤细胞凋亡(P<0.05),抑制c-Myc、SOX4、波形蛋白(Vimentin)和锌指E-box结合同源盒1(Zeb1)的表达量(P<0.05),同时促进E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达(P<0.05)。结论CDK5表达和活性的降低可通过c-Myc/SOX4/Zeb1信号通路抑制去势抵抗性前列腺癌细胞DU145的恶性增殖和侵袭转移。

摘要： 肿瘤转移相关基因1 (MTA1)是MTA (metastasis-associated gene)家族中最早被发现的基因,它与肿瘤的侵袭、转移等有关。MTA1在多种肿瘤组织中高水平表达,例如乳腺癌、结直肠癌、胃癌等,并且它被证实与这些肿瘤的预后不良密切相关。近年来的研究发现,MTA1在肺癌中也呈高表达状态,并且参与肺癌发生发展过程中多种信号通路的调节。因此,本文对MTA1在肺癌发生发展中的作用及调控机制的研究进展进行阐述。

摘要： 目的探讨长链脂酰辅酶A合成酶4(long train acyl⁃CoA synthetases 4,ACSL4)调控环氧合酶2(cyclooxygenase⁃2,COX2)的表达促进乳腺癌细胞转移的作用和分子机制。方法在不同侵袭表型的乳腺癌细胞中过表达或敲低ACSL4,利用划痕实验和Transwell实验检测细胞的侵袭能力,TCGA数据库分析ACSL4与COX2的表达关系,利用qPCR和Western blot验证ACSL4对COX2的调控作用,ELISA检测COX2催化的代谢产物前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的分泌水平。结果TCGA数据库分析结果显示ACSL4与COX2表达呈正相关(r=0.15,P<0.05)。在低侵袭性乳腺癌细胞MCF⁃7过表达ACSL4,可明显增加该细胞的侵袭能力,同时COX2和波形蛋白表达也增加。在高侵袭性乳腺癌细胞MDA⁃MB⁃231细胞中敲低ACSL4表达可显著逆转该细胞的侵袭能力,同时COX2和波形蛋白表达也降低。ELISA实验提示,敲低ACSL4后,COX2催化的代谢产物PGE2水平降低,过表达ACSL4后,PGE2水平升高。结论ACSL4通过调控COX2表达促进PGE2的分泌,进而增强乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,为乳腺癌转移的临床治疗提供了新的实验依据和治疗策略。

摘要： 目的 研究发现富含脯氨酸蛋白11(PRR11)在多种恶性肿瘤组织中呈现高表达状态,但与鼻咽癌的相关研究比较少见。文章探讨PRR11在鼻咽癌组织中的表达及其对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 采用免疫组化法检测54份鼻咽癌组织及其相应癌旁组织中PRR11蛋白表达,并分析其与临床病理参数的关系;采用qRT-PCR和Western blot法检测正常鼻咽上皮细胞NP69及鼻咽癌细胞系(CNE-2、6-10B、CNE-1、HONE-1、SUNE-1)中PRR11 mRNA和蛋白表达水平。应用siRNA技术沉默鼻咽癌CNE-1细胞中PRR11基因表达,并将细胞分为空白对照组、siRNA对照组和PRR11干扰组,采用qRT-PCR和Western blot法检测各组细胞中PRR11mRNA和蛋白表达水平;MTT法检测各组细胞增殖活性;Transwell法检测各组细胞侵袭和迁移能力;Western blot法检测各组细胞中上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果 PRR11在鼻咽癌组织中表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。鼻咽癌细胞系中PRR11 mRNA和蛋白表达水平均显著高于正常鼻咽上皮细胞NP69(P<0.05)。与空白对照组或siRNA对照组比较,si-PRR11组细胞中PRR11 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),同时细胞迁移、侵袭能力及增殖活性均明显降低(P<0.05),Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平均显著下调(P<0.05),而E-cadherin蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。与空白对照组迁移数目[(74.25±7.36)个/视野]、侵袭数目[(55.30±4.15)个/视野]比较,si-PRR11干扰组[(36.81±5.74)、(27.81±5.93)个/视野]明显降低(P<0.01)。结论 PRR11在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中高表达,沉默其表达可抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭。

摘要： 目的研究心肌素(myocardin, MYOCD)基因对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞增殖、迁移侵袭能力的影响及机制。方法 TCGA数据库、荧光实时定量PCR与Western blot检测结直肠癌组织与正常组织中的MYOCD基因表达差异;构建高表达MYOCD结直肠癌细胞系,CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验、划痕实验检测CRC细胞迁移、侵袭能力,运用生物信息学方法研究MYOCD对CRC组织干细胞特性的影响,并用克隆形成实验进一步验证。结果 CRC组织中MYOCD与正常组织相比呈低表达状态,MYOCD的过表达可抑制CRC细胞的增殖,但对CRC细胞的迁移与侵袭无明显影响,生物信息学分析提示MYOCD可抑制CRC细胞的干细胞特性,细胞实验进一步证明过表达MYOCD可抑制CRC细胞的CD133表达,并明显抑制CRC细胞克隆形成能力。结论MYOCD基因可抑制CRC细胞的增殖但对细胞迁移、侵袭能力无明显影响,该过程可能是通过抑制CRC的干细胞特性实现。

摘要： 目的筛选与胃癌转移相关的长链非编码RNA(lncRNA),寻找可预测及逆转胃癌转移相关的候选基因。方法利用高通量lnc RNA芯片技术分别检测3例未发生远处转移胃癌组织和3例发生远处转移胃癌组织中lncRNA及mRNA表达谱的差异,并对差异表达基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析。结果远处转移胃癌组与无远处转移组相比,有549个lncRNAs及386个mRNAs差异性表达具有统计学意义,其中远处转移胃癌组织中表达升高的lncRNAs共230个,表达升高的mRNAs共208个,表达下降的lncRNAs共319个,表达下降的mRNAs共178个。GO分析显示差异性表达基因的功能主要涉及到肿瘤细胞的生长、代谢、浸润、免疫调节等多种生物过程。KEGG分析显示差异性表达基因的通路主要涉及到细胞因子及其受体相互作用、趋化因子、细胞代谢等信号通路。结论筛选出了胃癌侵袭转移相关的lncRNAs,深入分析这些差异表达lncRNAs的功能及机制可为胃癌侵袭转移寻找出特异性肿瘤标志物及有效治疗靶点。

摘要： 目的:本研究旨在探讨长链非编码RNA锌指蛋白反义链1(ZFAS1)作为ceRNA吸附miR-541-3p对胃癌侵袭转移的影响。方法:qRT-PCR对癌旁组织、胃癌组织以及人胃黏膜上皮细胞株、胃癌细胞株中ZFAS1和miR-541-3p的表达进行检测。验证ZFAS1和miR-541-3p的之间的靶向关系。取ZFAS1表达最高的细胞用于后续试验并转染miR-541-3p inhibitor、ZFAS1-shRNA等。MTT检测细胞增殖,Western blot检测侵袭转移相关因子的表达,Transwell测定细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:癌组织中ZFAS1表达增多而miR-541-3p表达减少,ZFAS1能够靶向抑制miR-541的表达(均P<0.05)。抑制ZFAS1表达能够抑制胃癌细胞增殖、侵袭以及侵袭转移相关因子的表达,诱导细胞凋亡,而敲除miR-541-3p后效果则相反(均P<0.05)。ZFAS1-shRNA对胃癌细胞的作用能够被miR-541-3p inhibitor挽救。结论:ZFAS1能够作为ceRNA吸附miR-541-3p,从而抑制胃癌细胞增殖和侵袭转移,促进细胞凋亡。

摘要： 目的：探讨健脾解毒方通过抑制MALAT1介导的β-catenin信号通路抗大肠癌侵袭转移的作用机理.rn 方法：利用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默MALAT1基因,观察健脾解毒方对大肠癌细胞侵袭转移及MALAT1介导的β-catenin信号通路的调控作用.rn 结果：健脾解毒方能够抑制大肠癌细胞的侵袭转移能力;健脾解毒方能够直接下调MALAT1基因的表达;健脾解毒方能够抑制大肠癌细胞胞核内β-catenin的积累及其下游靶基因MMP-7的表达;MALAT1基因能够增加β-catenin在细胞核内的积累及其下游靶基因MMP-7的表达.rn 结论：MALAT1通过激活β-catenin信号通路并促进下游靶基因MMP-7的表达以达到促进大肠癌细胞侵袭转移的目的,而健脾解毒方能够通过直接抑制MALAT1的表达发挥抗大肠癌细胞侵袭转移的作用.

摘要： 研究背景:肺癌是目前我国发病率和死亡率最高的肿瘤,很多基因的突变和丢失与肺癌的转移有关,在本实验中,主要研究SDH5基因,该基因和很多肿瘤的发生和发展都有关系,丢失SDH5基因能增加肿瘤的侵袭转移能力,但是,SDH5基因在肺癌中的侵袭转移作用目前还没有报道实验。方法:在实验中,通过免疫沉淀,Western blot,免疫组化,细胞转染,细胞侵袭等多种实验方法,阐明了SDH5基因和肺癌的EMT现象之间的关系.实验结果:SDH5能调节肺癌细胞的波形蛋白和E-cadherin的表达,在实验中,分别从细胞,动物,患者标本三个方面来阐明SDH5和肺癌EMT之间的关系,同时研究还发现了SDH5通过(GSK)-3β-β-catenin信号通路来影响肺癌的EMT现象.结论:SDH5能调节肺癌的EMT现象,与肺癌的转移有关,可能成为肺癌预后的一个指标.

摘要： 目的:MicroRNAs(miRNAs)是一种非编码的小分子RNA,在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用,miRNAs对肺癌转移的作用及机制仍需进一步阐明。本研究在国内外首次发现在具有不同转移潜能的人高低转移潜能大细胞肺癌细胞株L9981和NL9980,以及人原发肺癌和转移癌病灶中表达水平具有显著性差异。本研究在国内外首次研究和探讨miR-212调控肺癌细胞侵袭转移能力的分子机制及信号通路。方法:应用microRNA芯片检测具有高低不同转移能力的人非小细胞肺癌细胞株miRNA表达谱,从中筛选出miR-212与非小细胞肺癌转移相关,进一步应用real-time PCR方法在不同非小细胞肺癌细胞系和临床肺癌原发肿瘤和转移肿瘤组织标本中验证miR-212的表达水平与肺癌转移的相关性。应用划痕实验、Boyden chamber实验和裸鼠体内成瘤实验研究miR-212对肺癌细胞侵袭转移能力的影响。应用染色质免疫共沉淀方法研究miR-212启动子组蛋白甲基化水平。应用靶基因预测软件预测并用双荧光素酶报告基因系统确定miR-212的靶基因。应用Western blot和siRNA干扰方法研究MMP16对肺癌细胞侵袭能力的影响。结果:(1)Western Blot和RT-PCR结果显示人高转移大细胞肺癌细胞株中miR-212低表达;(2)Western blot和RT-PCR结果显示MMP16在高转移能力肺癌细胞系及淋巴转移灶组织中高表达;(3)RT-PCR结果显示人NSCLC转移淋巴结组织中miR-212表达水平显著低于原发肿瘤组织;(4)应用siRNA干扰方法下调MMP16表达可抑制肺癌细胞的侵袭;(5)miR-212通过下调MMP16的表达水平抑制肺癌细胞的侵袭转移;(6)染色质免疫共沉淀方法研究发现,miR-212启动子组蛋白H3- K27的甲基化引起miR-212在肺癌细胞中表达水平的下调。(7)体外侵袭实验和裸鼠体内成瘤实验结果显示miR-212可抑制肺癌细胞的侵袭;(8)MMP16为miR-212调控的靶基因,MMP16在高转移能力肺癌细胞系及淋巴转移灶组织中高表达。结论:(1)miR-212低表达和MMP16的高表达与肺癌高侵袭转移潜能有密切关系;(2)miR-212通过调控MMP16表达抑制肺癌的侵袭转移潜能;(3)miR-212启动子组蛋白H3- K27的甲基化使miR-212失活,并失去对MMP16的调控,导致肺癌侵袭转移。

摘要： 本文检测喉鳞癌组织中Hsa-miR-145-5P/FSCN1表达水平,总结两者临床意义及与预后的关系.明确Hsa-miR-145-5P/FSCN1轴在喉鳞癌侵袭转移中的生物学功能及其调控紊乱的机制.通过生物信息学及双荧光报告载体验证两者直接调控关系.检测两者在癌及癌旁正常切缘黏膜中的表达水平.通过gain/loss-of-function体外观察两者在喉鳞癌细胞株HeP-2、TU-177中的分子生物学功能,同时利用共聚焦及电镜技术观察两者对细胞骨架形成及细胞凋亡征象的影响;通过裸鼠移植瘤模型,观察-miR-145-5P及si-FSCN1体内抗瘤效果.对miR-145-5P启动子进行甲基化测序并观察上皮-间质转化(EMT)关键分子的表达，总结miR-145-5P/FSCN1轴调控紊乱在EMT过程中的作用。结果表明，喉鳞癌中存在显著差异性microRNA表达谱。miR-145-5P在喉鳞癌中扮演抑癌基因角色，而靶基因FSCN1扮演癌基因角色。同时伴有miR-145-5P低表达且FSCN1高表达的个体预后不良，且这一分子特征是喉鳞癌患者预后的独立危险因素。miR-145-5P启动子高甲基化导致其功能失调，促进喉鳞癌细胞恶性表型，这一生物学效应是通过其靶基因FSCN1异常上调所介导。本研究明确了miR-145-5P/FSCN1轴调控紊乱是喉鳞癌中的重要分子事件，为以microRNA为靶点分子靶向治疗喉鳞癌行提供新思路及理论依据。

摘要： 目的：研究TRIM29、SQSTM1、RDX基因在不同转移潜能鼻咽癌细胞系中的表达水平,了解其与鼻咽癌细胞侵袭转移的关系,揭示TRIM29在鼻咽癌细胞侵袭转移中的作用.rn 方法：(1)采用qRT-PCR(Quantitative Reverse transcriptase Polymerase chain reaction)和蛋白印迹法(Western Blotting)分别检测高转移潜能鼻咽癌细胞系5-8F和低转移潜能鼻咽癌细胞系6-10B中TRIM29、SQSTM l、RDX基因的mRNA和蛋白表达水平;(2)脂质体转染法将TRIM29特异性SiRNA载体和空白载体转染5-8F细胞,建立稳定转染细胞系;(3)采用Western Blotting检测细胞中TRIM29蛋白表达水平的变化;MTT法检测细胞增殖能力的变化;流式细胞仪检测细胞周期分布的变化;划痕实验观察细胞迁移能力的变化.rn 结果：(1)5-8F细胞中TRIM29、SQSTM l的表达水平明显高于6-10B细胞,而RDX的表达水平低于6-10B细胞;(2)建立了TRIM29低表达的5-8F细胞系及其空白载体稳定转染细胞系;(3)与空白载体转染的5-8F细胞和未转染5-8F细胞比较,特异性SiRNA转染的TRIM29低表达5-8F细胞的增殖能力降低,G0/G1细胞增加,而S期细胞减少,细胞迁移能力降低.rn 结论：(1)SiRNA干扰TRIM29表达抑制鼻咽癌5-8F细胞的生长和迁移;(2)TRIM29、SQSTM1与鼻咽癌转移密切相关,有望成为预警鼻咽癌转移的分子标志物,但RDX与鼻咽癌转移关系不确定。

摘要： 目的:选取miR-369-3p和miR-483-5p作为研究对象,研究其在NSCLC转移中的作用及其机理。方法:应用real-time PCR验证了miR-369-3p在L9981/ NL9980和95D/95C细胞中的差异表达水平,通过划痕实验、Boyden chamber侵袭实验、MTT实验分别检测了它对肿瘤细胞迁移能力、侵袭能力及增值能力的影响,并通过生物信息学方法预测了miR-369-3p的靶基因,应用荧光报告基因系统初步验证了miR-369-3p的靶基因。此外,应用real-time PCR验证了miR-483-5p在L9981/NL9980细胞中的差异表达水平,并进一步通过boyden chamber侵袭实验检测了它对肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果:1.高转移人肺大细胞肺癌细胞株L9981中miR-369-3p的相对表达水平较低转移人肺大细胞肺癌细胞株NL9980中高2.1倍.2.增加miR-369-3p在低转移能力的NL9980中的相对表达,能够显著促进NL9980细胞的迁移能力.3.降低miR-369-3p在高转移能力的L9981中的表达水平,能够显著降低L9981细胞的侵袭能力;相反,增加miR-369-3p在低转移能力的NL9980中的表达水平,能够显著促进NL9980细胞的侵袭能力.4.增加miR-369-3p在低转移能力的NL9980中的表达水平,对NL9980细胞的增殖能力没有显著影响.5.生物信息学预测WSB1可能是miR-369-3p的靶基因。6.0荧光报告基因系统证明miR-369-3p通过WSB1的3'UTR来抑制WSB1基因的表达,推测WSB1可能是miR-369-3p的靶基因。7.高转移潜能人肺大细胞肺癌细胞株L9981细胞株中miR-483-5p的表达水平显著低于低转移潜能人肺大细胞肺癌细胞株NL9980细胞株.8.L9981-miR-483-5p-mimics细胞株体外侵袭能力显著低于L9981和L9981-miR-483-5p-control,但L9981-miR-483-5p-control与L9981细胞株间体外侵袭能力比较无显著性差异.结论:人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中存在miR-369-3p的过表达;miR-369-3p在L9981细胞中的表达可能与L9981细胞的迁移能力和侵袭能力相关,而对细胞的增殖能力没有显著影响;miR-369-3p可能通过WSB1基因参与调节L9981的迁移和侵袭;人高转移大细胞肺癌细胞株L9981细胞中存在miR-483-5p的低表达;外源性miR-483-5p能显著抑制人高转移大细胞肺癌细胞株L9981体外侵袭能力。

摘要： 目的：研究端粒酶启动子调控nm23-H1基因逆转人肺腺癌转移机制。方法：通过浓度梯度法测定A549m23-H1-shRNA细胞的潮霉素最佳筛选浓度;分别利用双酶切的和PCR的技术手段，获取重组表达载体DNA的大小片段，然后经过连接酶进行DNA大小片段的连接，最终得到我们所需要的重组表达质粒;应用real time PCR及Western blot检测nm23-H1基因在A549m23-H1-shRNA-luc细胞中的表达情况;将A549m23-H1-shRNA-luc细胞株接种于裸鼠右后腹股沟皮下后，应用活体成像技术检测shRNA抵抗的nm23-H1 cDNA对A549m23-H1-shRNA-luc细胞在裸鼠体内成瘤性和转移能力的影响。结果:L.A549m23-H1-shRNA细胞株的潮霉素最佳筛选浓度为300μg/ml;通过限制性内切酶NheI和XbaI对PGL3-htp26O-Enhancer质粒进行双酶切，成功获得构建重组表达载体的DNA大片段;Real time PCR及western blot实验结果显示，对shRNA抵抗的nm23-H1 cDNA能够通过转染试剂转入A549m23-H1-shRNA-luc细胞中，并能正常表达nm23-H1 mRNA及nm23-H1蛋白。活体内成像结果表明，shRNA抵抗的nm23-H1 cDNA能抑制A549m23-H1-shRNA-luc细胞在裸鼠体内的成瘤性和转移能力。结论:成功构建转基因肺癌细胞株A549m23-H1-shRNA-luco;成功构建重组表达载体PGL3-htpzso-nm23-H1 cDNA(shRNA-resistant nm23-H1 cDNA);shRNA抵抗的nm23-H1 cDNA能在A549m23-H1-shRNA-luc细胞株中正常表达nm23-H1 mRNA和nm23-H1蛋白;转染shRNA抵抗的nm23-H1 cDNA能在体内外抑制A549m23-H1-shRNA-luc细胞的增殖和侵袭转移能力。

摘要： 目的：应用SSH技术构建不同转移潜能的人大细胞肺癌细胞株NL9980和L9981间差异表达基因的消减cDNA文库，筛选、鉴定出转移相关基因的cDNA片段的基础上，对筛选鉴定得到的消减cDNA文库中差异表达的基因进行文献检索、比对及进一步验证，为进一步发现和研究潜在的肺癌转移相关基因提供新的思路和新的视角。方法:(1)应用SSH技术，以人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980和人高转移大细胞肺癌细胞株L9981为研究对象，构建人大细胞肺癌高低转移株差异表达基因正向消减cDNA文库和反向消减cDNA文库;(2)应用蓝白菌落及PCR技术筛选获得阳性克隆，应用斑点杂交的方法对正向和反向消减cDNA文库进行杂交筛选，确定差异表达片段对应的克隆;(3)对差异表达的片段进行序列分析，并将序列分析结果通过NCB工核昔酸数据库BLAST信息途径，进行同源性检索和比对;(4)将上述初步筛选鉴定得到的候选差异表达基因在文献中进行检索和聚类分析，探索各差异表达基因的功能及其与肿瘤的潜在联系;(5)应用实时荧光RT-PCR检测初筛后的各差异表达基因的mRNA表达情况;结果:(1)成功构建人大细胞肺癌高低转移株差异表达基因正向消减cDNA文库和反向消减cDNA文库;(2)经蓝白菌落筛选和斑点杂交获得阳性克隆，正向消减文库挑选55个克隆成功测序，经同源性分析最终确定差异表达基因片段23个与已知人类全长基因具有很高相似性;反向消减文库挑选31个克隆成功测序，经同源性检索和比对最终确定差异表达基因片段16个，其中15个与人类全长基因具有很高相似性;(3)对经SSH初筛的差异表达基因进行文献检索及聚类分析，在正向消减文库及反向消减文库的34个差异表达基因中，有6个基因被报道与肿瘤发生、发展、凋亡或耐药性的获得相关，有5个基因被报道与肿瘤侵袭转移相关;(4)对正向消减文库及反向消减文库中的差异基因进行实时荧光RT-PCR检测，有12个基因的mRNA在人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980和人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中的表达具有显著性差异,且与SSH结果相符，其中ANXA2,KRT18和ACTG1的差异性表达在2倍以上;结论:应用抑制消减杂交技术成功构建了人大细胞肺癌高低转移株差异表达基因消减cDNA文库;在正向消减和反向消减文库中筛选到34个差异表达基因，其中有6个基因可能与肿瘤产生、发展和凋亡相关，有5个基因可能与肿瘤侵袭转移性相关;差异表达基因ANXA2和ACTG1 mRNA和蛋白在人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中的表达水平均显著高于人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980;ANXA2和ACTG1可能是与肺癌侵袭转移相关的候选基因之一。

摘要： 目的:探讨抑癌基因LKB1在肺癌EMT中的作用及其分子机制.方 法:应用细胞培养、Western blot,RT-PCT,免疫共沉淀等技术检测肺癌中抑癌基因LKB1的表达水平;应用Western blot,RT-PCT等技术检测临床肺癌LKB1和NEDD9基因的表达水平及其与肺癌的恶性进展和转移的相关性;应用Western blot,RT-PCT等技术检测肺癌中NEDD9基因表达水平;应用免疫共沉淀等技术检测LKB1基因调控共转录因子CRTC1的核质转位及其对NEDD9的转录表达的影响;应用Western blot,RT-PCT,免疫共沉淀等技术检测肺癌EMT相关分子的表达,以及LKB1和CRTC1-NEDD9对肺癌EMT的影响;应用Boyden和动物模型研究LKB1和CRTC1-NEDD9对肺癌侵袭转移的影响及其分子机制.结果:本研究中发现CRTC1-NEDD9信号轴通过上皮细胞间叶转化这种细胞自主性调控方式赋予了肺癌细胞更高的自身侵袭转移能力,从而介导了LKB1缺失引起的肺癌进展和转移.LKB1通过调控共转录因子CRTC1的核质转位影响NEDD9的转录表达;NEDD9的高表达促进了KrasG12D原发性小鼠肿瘤的进展,反之,shNedd9则抑制了KrasG12D,Lkb1L/L原发性小鼠肿瘤的进展和转移;进一步的体内外研究结果表明NEDD9是通过影响FAK活性来调控肺癌细胞的EMT.此外,临床样本的相关性分析结果显示NEDD9的高表达与肺癌的恶性进展和转移呈显著性正相关,提示NEDD9是潜在的肺癌转移和预后的生物学标记物.结论:LKB1基因通过调控CRTC1的核转位参与NEDD9的表达参与调控肺癌EMT,进而影响肺癌侵袭转移.

摘要： 目的:探讨侵犯颈段气管和/或颈段食管的分化型甲状腺癌的外科处理方法、围手术期及术后并发症处理。rn 方法:回顾性分析2009年9月至2013年7月我院外科处理的18例侵犯颈段气管和/或颈段食管的分化型甲状腺癌，分析其临床特点、病理、手术方式和要点、围手术期处理、术后并发症及其处理。rn 结果:侵犯颈段气管和/或食管的分化型甲状腺癌18例，病理为乳头状癌者16例，滤泡性癌者2例，初治4例，术后或综合治疗后复发14例。18例均侵犯颈段气管，侵犯颈段食管7例，侵犯喉3例，侵犯颈总动脉2例，14例行颈段气管袖状切除+直接端端吻合术，气管缺损2-Scm，行颈段气管部分切除术4例，行颈段食管部分切除术4例，行颈动脉切除+重建术2例，行环状软骨部分切除4例，使用游离皮瓣修复颈段食管缺损2例，行游离皮瓣修复颈段气管缺损1例。术后出现呼吸困难5例，其原因包括吻合口气管软骨外露1例、吻合口狭窄1例，双侧声带麻痹或活动差3例。rn 结论:侵犯颈段气管和/或食管的晚期分化型甲状腺癌的外科处理难度较大，常需要多学科协作。侵犯颈段气管行气管袖状切除长度不超过Scm者可直接拉拢缝合;对于有颈段食管侵犯的病例，要做好皮瓣修复的准备。常见的并发症是声带麻痹或吻合口狭窄导致的呼吸困难，可行二氧化碳激光手术。

摘要： 本发明提供了用于确定受试者中肿瘤状态的方法，包括以下步骤：(i)确定取自受试者的样品中第一生物标志物的定量值，所述第一生物标志物选自由Ran、Ran结合蛋白1、Ran蛋白的活性片段、编码Ran的核酸序列、编码Ran结合蛋白1的核酸序列、编码Ran的活性片段的核酸序列和编码Ran结合蛋白1的活性片段的核酸序列组成的组；(ii)将样品中第一生物标志物的定量值与第一生物标志物的选定的预定阈值进行比较；(iii)确定来自同一受试者的样品中选自由MMP2、MMP2的活性片段、编码MMP2的核酸序列和编码MMP2的活性片段的核酸序列组成的组的第二生物标志物的定量值；(iv)将样品中第二生物标志物的定量值与第二生物标志物的选定的预定阈值进行比较；其中样品中第一标志物和第二生物标志物的定量值与它们各自的选定的预定阈值的比较指示肿瘤样品是否具有侵袭和/或转移潜力。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因、表达载体及应用，基因为LINC00850，为长链非编码RNA是不具有编码蛋白质能力的RNA，长度大于200nt；LINC00850位于X染色体，长度为697bps，sequence name为NR_109813。本发明通过检测正常乳腺上皮细胞MCF‑10A以及乳腺癌细胞中LINC00850的表达情况；与正常乳腺上皮细胞MCF‑10A相比，LINC00850在乳腺癌细胞中的表达明显上调，在高侵袭性细胞MDA‑MB‑231中的表达量最高，在低侵袭性细胞MCF‑7中的表达量最低。本发明对于乳腺癌的诊断和治疗具有重要的意义。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因、表达载体，抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因为LncRNA‑AC024560.3，位于3号染色体，RNA长度为956bps，sequence name为ENST00000453454。本发明实验表明，与正常乳腺上皮细胞MCF‑10A相比，LncRNA‑AC024560.3在乳腺癌细胞中的表达明显上调，而且在高侵袭性细胞MDA‑MB‑231中的表达量最高，在低侵袭性细胞MCF‑7中的表达量最低。本发明对于乳腺癌的诊断和治疗具有重大意义。

摘要： 本发明公开一种抗前列腺癌侵袭转移的组合物及其在制备治疗前列腺癌转移药物方面的应用；具体包括协同应用雷公藤内酯和ST6Gal I小干扰RNA(ST6Gal I‑shRNA)的药物组合方案，解决了临床单独应用雷公藤内酯存在毒性大以及单独应用ST6Gal I小干扰RNA(shST6Gal I)可能存在干扰不彻底或影响相似基因功能的问题。在明显增加抗肿瘤转移效果的同时，降低了雷公藤内酯的毒性及对其他相似组织、基因功能的影响，将有助于该药物后期研发，为抑制前列腺癌转移提供新的治疗思路。

摘要： 本发明公开一种抗前列腺癌侵袭转移的组合物及其在制备治疗前列腺癌转移药物方面的应用；具体包括协同应用雷公藤内酯和ST6Gal I小干扰RNA(ST6Gal I‑shRNA)的药物组合方案，解决了临床单独应用雷公藤内酯存在毒性大以及单独应用ST6Gal I小干扰RNA(shST6Gal I)可能存在干扰不彻底或影响相似基因功能的问题。在明显增加抗肿瘤转移效果的同时，降低了雷公藤内酯的毒性及对其他相似组织、基因功能的影响，将有助于该药物后期研发，为抑制前列腺癌转移提供新的治疗思路。

摘要： 本申请的实施例提供了一种装置的生产方法，所述装置体外模拟原发性肿瘤位点、次级远隔器官和循环的人体微环境。还提供了方法和装置，所述方法和装置提供用于分离原发性肿瘤、侵袭转移性细胞的平台，用于评价转移性肿瘤的治疗效果和诊断。

摘要： 一种多肽修饰的金团簇及通过抑制组织蛋白酶B活性抗肿瘤侵袭转移的应用，属于生物制剂技术领域。多肽与金团簇结合；通过一步法混合金盐溶液和特定序列多肽，在碱性条件下反应。设计多肽序列既包含组织蛋白酶B底物肽序列，又引入带电氨基酸和疏水性氨基酸提高靶向结合的稳定性，合成高选择性、高效抑制CTSB活性的多肽保护的金团簇，从而抑制肿瘤细胞外基质降解，对抑制恶性肿瘤的侵袭转移具有潜在的治疗作用。

摘要： DNASE1L3基因作为肝癌侵袭转移的检测和/或防治靶点的应用，涉及生物医药技术领域，通过检测DNASE1L3基因的表达水平预测高NETs环境所致肝癌侵袭转移的风险。在高NETs环境下，胞外游离DNA含量升高，这些DNA对肿瘤细胞的侵袭转移具有极强的促进作用。持续的糖尿病状态可促进患者中性粒细胞发生NETosis，由此释放NETs；DNASE1L3基因的表达缺陷可导致胞外DNase1L3蛋白含量减少，对胞外DNA降解障碍，对高NETs环境所致肝癌细胞侵袭转移具有极强的增效作用。DNASE1L3基因作为肝癌侵袭转移的检测和/或防治靶点，可为此类肝癌的检测和/或防治以及药物筛选提供一种新的方法。

摘要： 本发明公开了一种食管癌侵袭转移演示模型，涉及医学教学技术领域；而本发明包括演示台，演示台的表面开设有椭圆槽，椭圆槽内设有内框板，演示台的一面设有两个模型本体，两个模型本体的外壁均开设有两个限位孔，椭圆槽和内框板之间设有移动机构，内框板的一面设有驱动机构；通过驱动转动杆转动，转动杆通过套筒使空心杆转动，空心杆通过活动杆和第一连轴使移动盘移动，移动盘沿着第一椭圆轨道和第二椭圆轨道之间的缝隙处移动，呈椭圆轨迹移动，移动盘通过第二连轴和底座板使模型本体同步移动，从而方便的实现了两个模型本体的移动，进而便于演示台四周的规培生观看两个模型本体，同时，有效的提高了食管癌的教学效果。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，具体是一种预测肝癌转移和预后的生物标志物酮戊二酸脱氢酶类似物(Oxoglutarate Dehydrogenase L；OGDHL)，本发明还提供检测肝癌细胞中OGDHL表达量的试剂在制备预测肝癌侵袭转移的试剂盒中的应用，以及OGDHL在制备抑制肝癌侵袭转移的药物中的应用。本发明提供了预测肝癌转移和预后的生物标志物OGDHL，并揭示了提高癌症细胞OGDHL表达水平将有效抑制肝癌的侵袭转移。本发明的结论解释了OGDHL低表达在肝癌细胞广泛普遍存在的原因，为评估临床样本中OGDHL作为肝癌诊断、预后、治疗新靶点的价值提供理论依据。