RNA干扰抑制Paralemmin-3表达对6-OHDA致帕金森性神经损伤的保护作用

摘要

目的探讨干扰paralemmin-3(PALM3)表达对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的帕金森性神经损伤的保护作用。方法将人骨髓神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)分为4组:未做处理的对照组,6-OHDA(100μmol/L)处理的模型组,转染control siRNA的siRNA-control组以及转染干扰PALM3的siRNA-PALM3组,逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)和Western blot方法检测各组细胞中PALM3以观察干扰效果。6-OHDA(100μmol/L)刺激上述后3组细胞24 h后,流式细胞仪术比较4组细胞的凋亡情况;2,7’-二氯荧光素二乙酸盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;INT显色反应法测定细胞内乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的含量;比色法测定细胞内还原性谷胱甘肽(GSH)的含量;Western blot方法检测细胞中p53、活化caspase-3、活化caspase-9、bcl-2以及Bax等蛋白水平。结果与其他组细胞相比,siRNA-PALM3组细胞内PLAM3蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论干扰SH-SY5Y细胞中PALM3表达,可显著减轻6-OHDA诱导的细胞毒性作用,可能是由于PALM3表达的减少,抑制了p53表达进而抑制细胞凋亡的caspase通路从而减轻了细胞损伤。