堆肥未培养细菌的宏基因组文库构建及新的木聚糖酶基因的克隆和鉴定

摘要

从自制堆肥样品中提取未培养细菌的总DNA,用柯斯质粒pWEB∷TNC为载体构建宏基因组文库,对文库进行筛选获得表达木聚糖酶活性的克隆,再进行亚克隆、测序分析以及Blastx搜索GenBank分析木聚糖酶基因.结果构建得到一个包含约5万个克隆的宏基因组文库,文库中外源DNA总容量约为1.8×106 kb,获得2个表达木聚糖酶活性的克隆:pGXN1050和pGXN1051,鉴定分析表明:pGXN1050上潜在的木聚糖酶基因umxyn11A具1个771bp的ORF(Open Reading Frame),可编码含257个氨基酸的蛋白质,所编码产物与混合纤维弧菌(Cellvibrio mixtus)的内切-1,4-β-木聚糖酶(GenBank索引号Z48925.1)的氨基酸序列有46%的一致性和57%的相似性;pGXN1051上潜在的木聚糖酶基因umxyn11B具一个723bp的ORF,可编码含241个氨基酸的蛋白质,编码产物与混合纤维弧菌的内切-1,4-β-木聚糖酶(GenBank索引号Z48925.1)的氨基酸序列有73%的一致性和80%的相似性.木聚糖酶Umxyn11A和Umxyn11B都属于糖基水解酶家族11的成员.