可用于将宏基因组文库转移至多种细菌物种中的基于RK2的广宿主范围克隆载体

摘要

本发明涉及用于在广泛的细菌宿主范围中克隆DNA的克隆载体，该载体为自主复制人工染色体，其包含：(i)RK2复制起点oriV；(ii)RK2接合转移起点oriT；(iii)来自RK2的par DE；(iv)克隆区；(v)另一个复制起点，其允许该载体以不超过1或2的拷贝数进行复制；其中该载体的大小不超过15kb，不含RK2的trfA，并且能够克隆至少12kb的插入片段，其中该载体中的RK2 DNA含量为不超过10％的RK2。本发明还涉及含有所述克隆载体的宿主细胞和载体系统。提供了克隆DNA和制备文库的方法以及所述载体和RK2复制子在宏基因组克隆中的用途。