宏基因组文库中卤化酶相关基因的筛选克隆与异源表达

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摘要

第一章绪论

1．1宏基因组学

1．2土壤宏基因组文库

1．3卤化酶

1．3．1卤过氧化物酶

1．3．2非血红素Fe2+α-KG及O2依赖型卤化酶

1．3．3氟化酶

1．3．4黄素依赖性卤化酶

1．4卤化物

1．5生物合成基因簇功能分析

1．6研究内容及意义

第二章宏基因组文库中色氨酸卤化酶基因簇的筛选

2．1实验材料及设备

2．1．1土壤样品

2．1．2试剂

2．1．3常用溶液的配制

2．1．4仪器设备

2．2实验方法

2．2．1文库质粒的筛选

2．2．2珠峰文库单克隆筛选

2．3实验结果及分析

2．3．1珠峰文库质粒筛选

2．3．2筛选单克隆

2．3．3单克隆进化树

2．4讨论

第三章土壤宏基因组文库中卤化酶的克隆及表达

3．1实验材料及设备

3．1．1试剂及酶

3．1．2常用溶液的配制

3．1．3仪器设备

3．2实验方法

3．2．2卤化酶ORF的克隆

3．2．3构建表达克隆

3．2．4诱导表达

3．2．5生化检测

3．3．1寻找卤化酶ORF

3．3．2卤化酶进化树

3．3．3构建色氨酸卤化酶基因表达克隆

3．3．4诱导表达及纯化

3．3．5克隆1907色氨酸卤化酶生化检测

3．4讨论

第四章色氨酸卤化酶基因簇的异源表达与分析

4．1实验材料及设备

4．1．1试剂及酶

4．1．2常用配制试剂

4．1．3仪器设备

4．2实验方法

4．2．1大肠杆菌EPI100、ET12567感受态细胞的制备

4．2．2阳性单克隆质粒的转化

4．2．3接合转移

4．2．4含色氨酸卤化酶相关基因的阳性克隆转化子的异源表达

4．3实验结果及分析

4．3．1构建重组质粒

4．3．2重组质粒的转化

4．3．3单克隆质粒异源表达产物分析

4．4讨论

全文总结与展望

全文总结

展望

论文创新点

参考文献

致谢