HepG2肝癌细胞外泌体对人树突状细胞成熟与功能的影响

摘要

目的:观察HepG2肝癌细胞外泌体对人树突状细胞(Dendritic cells,DC)成熟和功能的影响.方法:采用透射电镜、Nano FCM和Western Blot鉴定和测定外泌体的形态、粒径分布及特征性蛋白的表达,用细胞因子GM-CSF(20 ng/ml)、IL-4(10 ng/ml)、IFN-β(105 U/ml)和LPS(10 ng/ml)诱导刺激DC成熟,用流式细胞术检测DC成熟相关表面分子CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达,ELISA检测培养上清液中细胞因子IL-12的水平,CCK-8法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力.结果:HepG2、MIHA来源外泌体表达CD63、Alix,同时不表达细胞色素C(Cytochrome C);在HepG2肝癌细胞外泌体刺激下,DC的CD80、CD83阳性表达率较仅加入LPS的对照组明显降低(P<0.05),而CD86、HLA-DR表达较对照组无明显差异;ELISA测定结果显示,200μg/ml HepG2 EXO干预后的DC较对照组分泌IL-12的量明显减少(P<0.05);CCK-8检测显示,200μg/ml HepG2 EXO干预的DC较对照组刺激异体淋巴细胞增殖的能力明显降低(P<0.05).结论:HepG2肝癌细胞外泌体对DC表面成熟相关分子表达、细胞因子的分泌、刺激异体T淋巴细胞增殖的能力均有一定的抑制作用.