靶向CysC基因shRNA慢病毒载体的构建对NSCLC A549细胞增殖的影响及机制初探

摘要

目的 构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)基因短发夹状RNA(shRNA)慢病毒载体,探讨其对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖的影响及可能机制.方法 以CysC基因为靶点,设计并合成目标shRNA,构建CysC-shRNA慢病毒载体并进行鉴定、包装及浓缩;后转染A549细胞,并用qRT-PCR检测Cy-sC mRNA水平评估敲除效率;用MTT实验和细胞克隆形成实验检测CysC-shRNA对A549细胞增殖的影响,并用Western Blot检测相关关键蛋白变化情况.结果 重组慢病毒感染A549细胞,72 h后于荧光显微镜下观察CysC-shRNA组和Ctr-shRNA组GFP表达情况,发现CysC-shRNA组GFP表达水平明显低于Ctr-shRNA组.用qRT-PCR检测各组CysC mRNA水平评估沉默效果,CysC-shRNA组、Ctr-shRNA组和空白对照组CysC mRNA水平比较差异有统计学意义(P<0.05),以CysC-shRNA组CysC mRNA水平最低,但后两组比较则无明显差异.CysC-shRNA组OD值、集落形成数量和大小、PI3K和Akt蛋白明显低于Ctr-shR-NA组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但后两组比较则无明显差异(P>0.05).结论 靶向下调CysC可明显抑制NSCLC细胞增殖,与PI3K/Akt信号通路相关.