菌落PCR快速鉴定Bcl-2基因及测序

摘要

目的 克隆大鼠Bcl-2基因(B cell lymphoma)全长cDNA,快速筛选重组pMD18-T-Bcl-2阳性克隆.方法 采用RT-PCR的方法从大鼠脾脏组织中扩增全长Bcl-2cDNA,将扩增产物克隆至pMD18-T栽体中,用单菌活PCR扩增快速鉴定DNA片段后酶切进一步鉴定及序列分析.结果 在筛选的阳性克隆中扩增到大鼠Bel-2基因,经菌落PCR、酶切鉴定及DNA序列分析证实该序列正确.结论 用单菌落PCR扩增快速鉴定克隆在pMD18-T载体上的Bcl-2基因是一种简便、经济的方法.成功克隆了Bcl-2基因,为进一步研究Bcl-2cDNA的基因功能及进行基因治疗奠定了基础.