TPO在COH/dhfr-中的表达及生物活性测定

摘要

目的:研究获得高效表达重组蛋白TPO-His的哺乳动物表达系统稳定细胞株.方法:采用overlap PCR拼接得到带有TPO信号肽的TPO N-端功能区序列；构建重组表达载体pCDNA3.1-TPO-His.然后将其与pSV2-dhfr载体磷酸钙法共转哺乳动物表达系统细胞系COH/dhfr-,经过G418、MTX及条件培养基多重压力筛选得到高效表达重组蛋白TPO-His的稳定细胞株；通过采用GIEMSA法检测TPO刺激UT-7/EPO-Mpl细胞的分化作用来测试重组蛋白TPO-His的生物活性.结果:经过多重压力筛选获得高效稳定分泌表达目的蛋白的细胞株CHO(dhfr-)/pCDNA3.1-TPO-His,其表达量可达2.8μg/106cells/24h,纯化蛋白具有较高的生物活性.结论:研究获得具有高效分泌表达目的蛋白的稳定细胞株,其表达产物TPO-His具有较高的生物学活性.