绵羊肺炎支原体RPA检测技术的建立

摘要

[目的]建立一种快速简便检测绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovi pneumoniae,Mo)的方法.[方法]根据Mo膜蛋白P80基因序列,利用Oligo 7软件设计并筛选出特异性扩增引物,通过条件优化建立检测Mo的RPA方法.[结果]该方法可特异性扩增Mo,对其他羊常见病原无特异性扩增,对Mo核酸的检测灵敏度为70fg·μL-1,与常规PCR敏感性一致.批内和批间结果显示Mo阳性样品均能扩增条带,而阴性对照均无扩增,表明重复性好.对186份临床样品应用建立的RPA方法和常规PCR方法同时进行检测,并对其中40份肺脏样品进行支原体的分离鉴定,结果显示分离鉴定出的13份Mo阳性样品及常规PCR法检测出的95份阳性样品经RPA检测,结果均为阳性.[结论]建立的Mo RPA方法特异性强、重复性好,可作为Mo的快速检测和流行病学调查的一项候选技术.