绵羊肺炎支原体SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

根据GenBank公布的绵羊肺炎支原体Y-98株(No.KM435069.1) P80基因序列,利用Beacon Designer 7.9软件设计1对特异性引物,建立了绵羊肺炎支原体的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法.结果 显示,该方法可以特异性检测绵羊肺炎支原体,对其他羊常见病原扩增结果无特异性扩增;该方法最低检测限为10copies·μ上L-1,组内和组间变异系数均小于2％;采用该方法对96份临床样品进行检测,绵羊肺炎支原体的阳性率为67.7％ (65/96),结果显示该方法与TaqMan实时荧光定量PCR方法检测结果一致.以上结果表明本研究建立的绵羊肺炎支原体SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于绵羊肺炎支原体的病原学检测和流行病学调查.