H2S通过诱导Klotho基因启动子去甲基化改善单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾脏纤维化

摘要

目的 探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)改善单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠肾脏纤维化的作用机制.方法 采用C57BL/6小鼠单侧输尿管结扎建立肾脏纤维化小鼠模型.随机分为假手术(Sham)组、UUO组和UUO+硫氢化钠(NaHS)组.ELISA法检测血清H2S浓度;HE染色和Masson染色观察肾脏病理改变;免疫组织化学和Western blot检测Klotho和DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)表达;RT-PCR检测双加氧酶(ten-eleven translocation,TET)表达;比色法检测TET活性;焦磷酸测序检测肾组织Klotho甲基化水平;羟甲基化DNA免疫共沉淀联合实时定量PCR法检测肾组织Klotho羟甲基化水平.结果 与Sham组相比,UUO组血清H2S浓度显著降低[(5.18±0.34)μmol/L vs.(4.23±0.21)μmol/L,P＜0.05].NaHS显著减轻UUO模型小鼠的肾小管间质纤维化(P＜0.01),下调α平滑肌肌动蛋白(P＜0.05)和纤连蛋白(P＜0.05)表达,同时上调UUO小鼠肾组织Klotho表达(P＜0.05),下调DNMT1表达(P＜0.01),升高TET活性[(0.03±0.01) ng.min-1.mg-1 vs.(0.43±0.08) ng.min-1·mg-1,P＜0.05],降低Klotho基因启动子甲基化水平(11.83％±0.53％ vs.7.39％±0.70％,P＜0.01),升高Klotho基因启动子羟甲基化水平(P＜0.05).结论 H2S可通过增强TET活性,诱导Klotho基因启动子去甲基化,上调Klotho基因表达,从而减轻UUO小鼠肾脏纤维化.