人组织因子在毕赤酵母中的表达和纯化

摘要

目的 制备具有凝血活性的重组人组织因子(recombinant tissue factor,r-TF)用于构建PT试剂盒.方法 将人组织因子胞外区编码基因与酵母表达载体重组,构建酵母表达质粒pPIC9K-TF,利用电穿孔法转化宿主菌Pichia pastoris GS115,转化子经G418抗性筛选后,获得高表达克隆.工程菌在摇瓶中经甲醇诱导,表达r-TF,表达产物经纯化后,鉴定生物活性.结果 SDS-PAGE证实表达产物的分子量为37 000～45 000,Western blot证明其为人组织因子衍生物,纯化后,r-TF经脂化后,具有促凝血活性,为研制凝血活酶时间测定试剂盒及研究TF的构效关系创造条件.结论 用毕赤酵母高效表达具有活性的rTF,表达量达到182 mg/L.纯化工艺简便易行,蛋白回收率高,纯化后的rTF可用于组装PT测定试剂盒.