重组人表皮生长因子在毕赤酵母中的表达与纯化及其复合可溶性微针的制备

摘要

目的:利用毕赤酵母X33表达重组人表皮生长因子(rhEGF),纯化后以透明质酸(HA)为基质制备rhEGF-可溶性微针贴片,以期增强rhEGF的透皮能力.方法:合成EGF-His编码基因,PCR扩增后连入pPICZαA质粒构建重组表达载体,线性化pPICZαA-hEGF-His载体后电转化毕赤酵母X33感受态,涂布高浓度博来霉素YPD平板,筛选高表达单克隆菌株;甲醇诱导表达,以硫酸铵沉淀及镍填料亲和层析方法纯化获得rhEGF;利用微模板浇铸法以HA为基质制备rhEGF-可溶性微针贴片,通过猪皮穿刺实验验证此贴片的穿透性及可溶性.结果:构建了pPICZαA-hEGF-His表达载体,通过筛选获得高表达X33菌株,经两步纯化后的EGF-His蛋白纯度约为90％;制备了rhEGF-可溶性微针贴片,此贴片能够穿透猪皮.结论:利用毕赤酵母表达并纯化获得高纯度的EGF-His蛋白;将EGF-His蛋白与微针技术相结合制备的rhEGF-可溶性微针贴片具有较好的穿刺性和溶解性.