小鼠心脏缺血再灌注模型中心肌树突状细胞的流式细胞评价

摘要

目的 通过小鼠心脏缺血再灌注模型明确心肌缺血时心肌树突状细胞(dendritic cell,DC)所占比例、动态变化及其与单核细胞的相对比例变化,以证明DC参与缺血损伤相关的免疫炎症反应.方法 制作小鼠的心脏缺血再灌注模型,心脏缺血30 min后分别于再灌注1、2、4和7天时摘取小鼠心脏,制备心脏单个细胞悬液.同时加入CD45、CD11c和Ly6C抗体进行流式细胞检测,策略为选取CD45阳性炎症细胞进一步行DC标记CD11c、单核细胞标记Ly6C的细胞亚群分析.假手术组作为对照组.结果 每只小鼠心脏制备所得的单个细胞悬液行细胞计数为(1～2)×106个.CD45阳性细胞占总细胞数的比例于再灌注1天时即达到高峰,逐渐恢复至对照组水平.CD45阳性细胞群中以CD11c和Ly6C标记细胞亚群的相对比例,以CD11e+ Ly6C+ DC动态变化最为明显,2、4、7天均有显著升高,7天时恢复至对照组水平;与此同时,CD11c+Ly6C-DC和CD11c-Ly6C+单核细胞的相对比例有短暂降低,CD11c-Ly6C-细胞的相对比例无显著变化.CD11c,Ly6C标记的各亚群细胞占心肌细胞数的比例在1～2天较对照组均有显著升高,7天时恢复至对照组水平.结论 小鼠心脏缺血再灌注后1天时CD11c+ Ly6C+ DC明显增多,在短期内可消退,提示DC参与缺血损伤相关的免疫炎症反应.