新型深海来源蛋白酯酶E4的纯化、结晶和X射线衍射分析

摘要

酯酶和脂酶是水解短链酯类和长链甘油三酯的两类水解酶,在制药和食品工业酯(脂)键的合成和分解过程中发挥着关键的作用.我们前期已鉴定深海细菌Croceicoccus marinus E4A9T来源的新型蛋白酯酶E4,该酶属于酯酶SGNH亚家族,具有潜在的水解溶血磷脂键的作用,但其催化机制尚不清楚,因此我们对蛋白E4进行了纯化、结晶和初步的X射线衍射分析.E4在大肠杆菌中高效表达,动态光散射(DLS)分析显示其主要以四体的形态均匀分布在溶液中.我们对E4进行了晶体初筛和优化,最终优化培养出棒状晶体且衍射分辨率达2.2.X射线衍射结果表明E4属于P43212空间群,晶胞参数为a=88.863,b=88.863,c=318.914,α=90°,β=90°,γ=90°.此外,酶学活力测定结果表明,它能够水解具有不同酰基链长度的酯类(C2～C10),尤其倾向于水解己酸酯(C6)和辛酸酯(C8).