松材线虫cyp-33D3基因的RNA干扰及其功能研究

摘要

[目的]研究松材线虫cytochrome P450 33D3(cyp-33D3)基因功能,为揭示松材线虫分子致病机制及其生物防治提供理论依据.[方法]采用双链RNA对cyp-33D3基因的表达进行干扰,测定该基因沉默后对松材线虫取食速率、个体大小、产卵数量、孵化率及致病力的影响.[结果]ddH2O和gfpdsRNA处理的线虫取食速度明显较快,在第5天已经几乎将灰葡萄孢菌丝取食殆尽,而cyp-33D3 dsRNA处理松材线虫取食灰葡萄孢的面积较小;cyp-33D3基因RNA干扰对松材线虫雌、雄成虫的体长无显著影响(P ＞0.05);与ddH2O和gfp dsRNA处理相比,cyp-33D3dsRNA处理每条雌虫平均产卵数量分别减低了12和11粒,虫卵孵化率分别减低了46％和43％;在接种40 d后,ddH2O处理的黑松苗发病率达到100％,cyp-33D3dsRNA处理的黑松发病率为43.1％;而gfpdsRNA处理的黑松生长状况良好.[结论]cyp-33D3基因RNA干扰减缓了松材线虫的取食速度,减少了松材线虫的产卵数量,降低了松材线虫的虫卵孵化率和对黑松的致病力;松材线虫cyp-33D3基因RNA干扰对线虫的个体大小无明显影响.