牙鲆(Paralichthys olivaceus)中不同亚型小清蛋白的提纯与鉴定

摘要

以牙鲆(Paralichthys olivaceus)为研究对象,以Tris、甘氨酸和二硫苏糖醇的混合溶液为提取液,加入不同量的硫酸铵分级纯化小清蛋白,应用免疫印迹法、酶联免疫法及质谱法进行鉴定.最终提纯得到3种不同分子质量的蛋白(PVI、PVII和PVIII),所得蛋白纯度大于90％,血清学实验证明其与小清蛋白特异性IgG及IgE抗体均有结合能力,质谱鉴定得到PVII和PVIII分子质量分别为12151 Da和11645 Da,pI值分别为5.14和4.69.该方法满足牙鲆小清蛋白提取纯化要求,得到的3种蛋白是牙鲆小清蛋白的不同亚型,且均具有过敏原性.