辣木籽抗氧化肽的制备及其对氧化损伤红细胞的保护作用

摘要

采用酶法制备辣木籽水解物,以抗氧化活性为跟踪指标,通过乙醇分级沉淀和大孔树脂柱层析法定向制备辣木籽抗氧化肽,构建模拟胃、肠道消化模型,评价辣木籽抗氧化肽胃、肠道消化物的氧自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC),利用超高效液相色谱-四极杆-高分辨飞行时间串联质谱技术解析消化物中多肽组成与结构,建立2,2'-偶氮二异丁脒盐酸盐(2,2'-azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochloride,AAPH)诱导大鼠红细胞氧化损伤模型,研究经胃、肠道消化后的辣木籽抗氧化肽对氧化损伤红细胞溶血的抑制作用.结果表明:采用20％(体积分数,下同)、40％乙醇分级沉淀辣木籽水解物去除杂质,取60％乙醇分级沉淀组分进行柱层析分离纯化,经水、20％乙醇、40％乙醇洗脱除杂,采用60％乙醇洗脱,定向制备得到富含抗氧化氨基酸、疏水性氨基酸的辣木籽抗氧化肽(蛋白质量分数92.84％,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力、ORAC分别为39.95、1454.57μmol/g);辣木籽抗氧化肽经模拟胃、肠道消化后,抗氧化活性增强,释放出更多短肽段,包括11条二肽、5条三肽;辣木籽抗氧化肽消化物、Gln-Met、Leu-Phe通过清除胞内活性氧,下调丙二醛含量与超氧化物歧化酶活力,拮抗AAPH所致氧化应激,有效抑制氧化损伤红细胞发生溶血.