一步柱层析纯化B-藻红蛋白及其毛细管电泳结合激光诱导检测

摘要

本研究采用硫酸铵沉淀结合DEAE-Sepharose FF离子交换柱层析技术分离纯化紫球藻中的B-藻红蛋白.试验结果表明,藻红蛋白粗提物经65%硫酸铵沉淀2d后过柱层析,B-藻红蛋白的纯度为A545nm/A280nm=3.0;而用65%硫酸铵沉淀2个月后,只需采用一步柱层析,B-藻红蛋白的纯度可提高到5.37,即达到纯品要求(纯度大于4.5).说明65%硫酸铵对B-藻红蛋白具有高度选择性,其工艺效果对分离纯化有很大影响.特征吸收光谱和荧光光谱证实纯化后的产物符合B-藻红蛋白的性质,Native-PAGE电泳只出现单一染色带,表明获得的B-藻红蛋白是均一的;SDS-PAGE电泳出现2条染色带,一条着色较深带为α和β亚基,分子量为16～18kD左右,另一条较浅为γ亚基,分子量大约为31kD.同时建立了涂层毛细管柱结合激光诱导荧光电泳技术快速检测B-藻红蛋白纯度的分析方法,结果出现单一峰,表明毛细管电泳用于B-藻红蛋白的纯度检测高效可靠.