蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质测定

摘要

大蒜中功能成分含硫化合物是由蒜氨酸酶(alliinase,E C4.4.1.4)催化蒜氨酸(alliin)生成的.本实验通过提取、盐析、透析及层析,自新鲜大蒜中分离纯化出蒜氨酸酶,并测定了蒜氨酸酶的酶学性质.蒜氨酸酶的适宜分离纯化过程及条件为:pH7.0 Na+/K+磷酸缓冲液提取,45%饱和度NH4(SO4)2盐析,10000×g离心沉淀30min,pH6.5的Na+/K+磷酸缓冲液溶解,截留1.4万分子量透析袋透析,Sephadex G-200层析,收集洗脱时间4.75h的洗脱液.蒜氨酸酶最适温度和pH值分别为30℃和6.3,Mgz+、Zn2+、Fe2+、Fe3+、EDTA-Na金属离子对蒜氨酸酶有激活作用,Fe3+激活作用最明显,Cu2+严重抑制蒜氨酸酶活性.以合成S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜为底物,蒜氨酸酶的Km为5.91mmol/L、Vmax为1.55μmol/min.