多基因串联表达木糖发酵工程菌株的构建

摘要

通过基因工程的手段,利用木糖发酵转化乙醇是近年来研究的热点.为引入木糖向木酮糖转化的途径,采用多重拼接PCR方法将木糖向木酮糖转化有关的木糖还原酶基因(xyl1)、木糖醇脱氢酶基因(xyl2)与转醛酶基因(tal1)进行拼接后克隆到表达载体pAUR123中,获得融合表达载体pAUR123-X12A;为超表达下游代谢途径的基因,将控制木酮糖向乙醇转化的木酮糖激酶基因(xks1)与转酮酶基因(tkl1)进行拼接后克隆到表达载体pAUR123中,获得融合表达载体pAUR123-SK.通过乙酸锂电击转化的方法分别将pAUR123-X12A与pAUR123-SK转入S.cerevisiae INVSc1中,得到S.cerevisiae INVSc1-X12A与S.cerevisiae INVSc1-SK重组子.对构建的重组子进行表达后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和酶活性分析,目的基因获得表达.初步结果显示两株重组菌构建成功.