交联草酸脱羧酶聚集体的制备及其性质

摘要

为了获得缓解泌尿系统草酸盐结石病症的酶制剂,用无载体固定化方法——交联酶聚集体(CLEAs)制备交联草酸脱羧酶聚集体.使用基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET32a/Yvr诱导表达制备草酸脱羧酶粗酶液,用30％的乙醇进行沉淀分离提纯,纯化倍数为2.7倍,酶活回收率91.2％；在戊二醛添加量为0.06％、pH5、牛血清白蛋白添加量0.5g/L、4℃的条件下处理该酶2h,得到交联草酸脱羧酶聚集体(oxdc-CLEAs),酶活回收率达95.4％；酶学性质研究表明,相对游离草酸脱羧酶,交联草酸脱羧酶聚集体的耐酸性、耐热性、耐胰蛋白酶降解能力均有提高.