HPLC法定量分析微生物法制备液中产物γ-氨基丁酸和底物L-谷氨酸

摘要

建立一种测定微生物法制备液中γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)和L-谷氨酸(L-glutamic,L-Glu)的高效液相色谱法.样品经10％三氯乙酸溶液预处理后,用4 mmol/L氯甲酰芴甲酯进行柱前衍生.采用Phenomenex C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以A[50 mmol/L乙酸钠溶液(pH 4.8)-甲醇-乙腈-四氢呋喃(82∶8.5∶8.5∶1,V/V)]:B[50 mmol/L乙酸钠溶液(pH 4.8)-甲醇-乙腈-四氢呋喃(22∶38.5∶38.5∶1,V/V)]=30∶70为流动相,流速1.0 mL/min,柱温40℃洗脱,检测波长265 nm.该方法稳定、灵敏、测定周期短、重复性好.在GABA和L-Glu质量浓度为20～400 μg/mL范围内有良好的线性关系.与常用衍生剂邻苯二甲醛相比,衍生产物的稳定性更好,且无需梯度洗脱.