油橄榄查尔酮合酶与查尔酮异构酶基因全长的克隆及序列分析

摘要

查尔酮合酶(chalcone synthase,Chs)与查尔酮异构酶(chalcone isomerase,Chi)是植物类黄酮合成代谢途径中的两个关键酶.采用同源克隆、反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、融合引物嵌套1CR(fusion primer and nested integrated PCR,FPNI-PCR)与3'-cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA end,RACE)相结合,分别克隆出油橄榄chs与chi基因全长.序列分析表明,油橄榄chs基因全长DNA(GenBank登录号:KF935223.1)和cDNA(GenBank登录号:KF935224.1)序列分别为2 085 bp 和1 173bp,该基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)编码390个氨基酸,其氨基酸序列与葡萄和番茄全长Chs氨基酸序列的相似度在90％左右.生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白属于Chs蛋白家族.油橄榄chi基因全长DNA(GenBank登录号:KF886190)和cDNA(GenBank登录号:KF886191)序列分别为1 373 bp和750 bp,其ORF编码249个氨基酸,该氨基酸序列与已报道的其他植物Chi氨基酸序列的相似度最高在65％左右,序列中包含一段由198个氨基酸残基组成的具有分子内裂解酶活性的功能域,符合Chi蛋白家族特征.