应用简并PCR方法检测转cry1A基因作物

摘要

根据不同转基因作物中cry1A基因的保守区序列,建立简并聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)对转cry1A基因作物检测方法.cry1A基因(包括cry1Ab、cry1Ac、cry1AblAc、cry1A.105、mcry1Ac)是抗虫转基因作物中使用频次最高的目的基因,常用作转基因成分筛选检测的靶标.应用Vector NTI Advance 11.5软件将已报道的20余种cry1A基因PCR检测方法中的引物与11个cry1A基因序列进行比对,结果显示,这些方法的引物序列不能同时与所有cry1A基因序列完全配对,每对引物的错配碱基数均大于3个,且许多错配发生在引物的3'端,表明这些cry1A基因检测方法理论上仅适用于部分特定的靶标基因.在对MON810、Bt11、Bt176等11种转基因作物中cry1A基因核苷酸序列进行比对分析基础上,以其5'端的保守核苷酸序列为模板,筛选到1对简并引物,建立了cry1A基因的简并PCR方法.应用该方法能特异性地检测11种转基因作物中的cry1A基因,检测灵敏度可稳定达到0.1％.该方法为转基因作物中cry1A基因的高效筛选检测提供了一种新的技术手段.