豆壳中过氧化物酶的提纯

摘要

建立一种从农作物废弃物--大豆豆壳中提纯过氧化物酶的方法,并检测其纯度和分子量.以大豆豆壳为原料,以酶活力和酶比活力为考察指标,经过粉碎,超声波提取,硫酸铵分级沉淀,透析,DEAE-Sepharose Flast Flow离子交换层析和Sephadex G-100凝胶柱层析等工艺过程,提纯豆壳过氧化物酶(soybean shell peroxidase,SSP),并通过SDS-PAGE电泳检测其纯度和分子量.提取酶原液的最佳工艺条件为:温度35℃,pH值5.2,液料比20 g/mL;硫酸铵分级沉淀浓度为50%～90%时,含蛋白质较多,酶活性最高;经过提纯后的豆壳过氧化物酶经SDS-PAGE电泳显示其分子量约为3.5×104 u～4.5×104 u范围内,Rz值为2.4.