基于氯霉素单克隆抗体的ELISA方法的建立

摘要

旨在建立一种用于检测海产品中氯霉素残留的ELISA检测方法.利用活化酯法将氯霉素半抗原连接到载体蛋白KLH上,制备氯霉素人工抗原,并免疫小鼠.通过杂交瘤技术筛选出一株能稳定分泌抗体的细胞株10A3B6E,经小鼠体内培养制备腹水并经纯化得到单克隆抗体.单克隆抗体的重链为IgG1,轻链为Kappa.通过对免疫分析方法工作条件的优化,建立了一种简便、快捷、实用的检测氯霉素的直接竞争ELISA方法.该方法IC50值为(0.54±.04)ng/mL,IC15值为(0.10±0.03) ng/mL.该抗体与氯霉素琥珀酸钠、甲砜霉素、氟甲砜霉素、链霉素的交叉反应率分别为78％、0.09％、0.25％和0.05％,与四环素的交叉反应率低于0.002％,说明该抗体是一种高特异性抗体.利用所建立的直接竞争ELISA方法对鳕鱼和虾样品进行检测,添加回收率在62.6％～120.0％之间,变异系数在0.94 ％～13.52％之间.本研究所建立的直接竞争ELISA方法具有较好的准确性和灵敏度,可以用来对海产品中的氯霉素残留情况进行检测.