牛肉PCR-核酸试纸条快速鉴定方法的建立及试剂盒的研制

摘要

该研究建立肉类食品中牛肉 PCR-核酸试纸条快速鉴定方法,并开发快速检测试剂盒.对国家标准中牛的特异性引物进行标记,研发牛肉 DNA 快速提取试剂和基因检测试剂,采用核酸试纸条进行可视化检测;应用分子克隆及测序技术,克隆牛肉标准品;并对试剂的特异性、重现性、稳定性及灵敏度进行考察.提取基因组 DNA 的方法简单、快速,DNA 的完整性、浓度及纯度均非常好;退火温度59 °C、在20 个循环时试纸条检测结果最特异,牛肉正品均出现 2 条条带,易混品及空白对照均出现 1 条条带.克隆测序后的牛肉 DNA 序列与牛线粒体 DNA 特异指纹区段序列同源性 100% .自主研发的试剂盒特异性、重现性、稳定性良好,模板 DNA 最低检出量为 1 pg/μL.该研究建立的 PCR-核酸试纸条方法特异性强、灵敏、准确、简便、快速;研制的试剂盒操作简便快速、结果可视稳定,适用于实地监测.