重组人Ⅲ型胶原蛋白的分离纯化

摘要

利用分泌表达重组人Ⅲ型胶原蛋白的毕赤酵母发酵液,通过层析条件的优化,建立了重组人Ⅲ型胶原蛋白一步层析纯化工艺.发酵液以硫酸铵(30％饱和度)沉淀胶原蛋白,沉淀用超纯水复溶后超滤转换介质至20 mmol/L磷酸缓冲液(phosphate buffer,PB)(pH 6.0),然后用SP Sepharose HP阳离子交换柱进行纯化,以20 mmol/L PB(pH 6.0)-150 mmol/L NaCl洗涤杂蛋白,以20 mmol/L PB(pH 6.0)-250 mmol/L NaCl洗脱重组人Ⅲ型胶原蛋白.采用该工艺对60 L发酵液进行重组人Ⅲ型胶原蛋白的纯化,产品纯度97.7％,总回收率68.8％,纯化的重组人Ⅲ型胶原蛋白纯度高,热原含量低,可用于医药领域.该研究建立了一步层析法从毕赤酵母发酵液中高效制备重组人Ⅲ型胶原蛋白的纯化工艺,工艺简便、稳定可靠,离子交换层析放大容易,为重组人Ⅲ型胶原蛋白的工业化生产奠定了基础.