弗氏链霉菌产硫酸新霉素高通量选育模型的建立及优化

摘要

建立基于多孔板发酵及酶标仪检测的高通量选育模型,提高诱变后硫酸新霉素高产菌株的筛选效率.对影响酶标仪检测的主要影响因素1.0×10-4mol/L曲利本蓝的添加量(μL/mL)进行优化,并建立相应的分光光度法,对适用高通量筛选模型的微孔板进行选择,并对其发酵条件进行正交优化.结果表明,曲利本蓝的添加量为500μL/mL,硫酸新霉素在1.284 ～ 10.272 U/mL,吸光度与样品浓度呈良好的线性关系(R2 =0.998 8),平均回收率为98.468 4％,重复性RSD为3.270 0％;24孔板适用于高通量筛选模型,优化后发酵条件:转速、装液量和接种量分别为220 r/min、2 mL和8％,在此基础上,实际发酵效价达到(6 825±77) U/mL,较原发酵条件提高了27.40％.基于多孔板发酵及酶标仪检测建立高通量选育模型,能够达到诱变后快速筛选硫酸新霉素高产菌株的目的,也为后续高通量选育其他抗生素高产菌株奠定了基础.