菊粉外切酶的异源表达、纯化及酶学性质

摘要

将菊粉降解菌Paenibacillus sp.Lfos16的菊粉外切酶基因克隆至表达载体pET-28a(+),转入Escherichia.coli BL21(DE3)中实现了异源表达.利用镍柱亲和层析纯化重组菊粉外切酶,并进行SDS-PAGE检测.重组菊粉外切酶的表观分子质量为87 kDa,经纯化后,重组菊粉外切酶的比酶活为348.30 U/mg.重组菊粉外切酶作用菊粉和蔗糖的酶活分别为259.37 U/mL和592.16 U/mL,I/S值为0.438,且重组酶水解菊粉的主要产物为果糖.重组菊粉外切酶最适作用温度为40℃,且当温度低于30℃时酶活较稳定;最适作用pH为6.Ag+、u2、Mn2+、Zn2+、Hg2+、Fe3+具有显著抑制作用.重组菊粉外切酶对菊粉的Km为19.28 mg/mL,Vmax为0.18 mg/(min·mL).