节杆菌10137β-呋喃果糖苷酶基因克隆及在大肠杆菌表达

摘要

以一株高产β-呋喃果糖苷酶的节杆菌10137基因组为模板,成功地扩增出β-呋哺果糖苷酶基因,基因片段长度为1 488bp,编码496个氨基酸.将扩增出的目的片段克隆到pFL-B13cl载体上,通过双酶切鉴定,确定该基因已成功克隆至表达载体.研究不同表达条件对β-呋喃果糖苷酶活性的影响,IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导温度22℃,诱导12h,比酶活可达1 412.30U/g,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白分子质量大小约为67 u,亲和层析纯化后比酶活为2 207.48 U/g.将重组大肠杆菌在2L发酵罐中培养,诱导10 h后β-呋喃果糖甘酶的比酶活为1 208.23 U/g.