一种酸性真菌α-淀粉酶的异源表达与重组酶性质

摘要

用PCR方法扩增扣囊复膜孢酵母CICIM Y1037菌株真菌α-淀粉酶基因成熟肽编码区(SfA),插入表达载体pPIC9K.重组质粒pPIC9K-SfA转化巴斯德毕赤酵母GSI15,筛选获得淀粉酶活力相对最高的重组菌Pichia pastoris GS115/pPIC9K-SfAmy LZ08.SDS-PAGE电泳分析纯化获得的重组酶SfA,结果显示重组酶分子质量为61 kDa左右.SfA最适反应温度为45℃、最适pH为4.5,是一种酸性α-淀粉酶.Ca2对SfA的热稳定性有促进作用,重组酶在含5 mmol/L Ca2+,pH4.5的溶液中,55℃保温4h酶活仍保留80％以上.SfA水解玉米淀粉获得麦芽寡糖和少量葡萄糖,其中麦芽糖和麦芽三糖为主要产物,分别占水解物的37％和39％.重组酶SfA在麦芽三糖和麦芽寡糖糖浆生产中有一定的应用潜力.