猪溶菌酶在大肠杆菌中的表达及其复性

摘要

作为C型溶菌酶的一种,猪溶菌酶(Sus scrofa lysozyme,SSL)是猪体内抵抗外源性疾病的一道重要屏障.鉴于猪在畜牧行业中的重要地位,尤其是在饲用抗生素的使用严重受限的今天,SSL的生产显得尤为迫切.化学合成得到了SSL的编码基因,通过BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切之后与载体pET-28a(+)连接,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.在25℃、200 r/min条件下,利用0.1 mmol/L的IPTG诱导8h,离心发酵液获得菌体.对其进行超声破碎获得重组蛋白包涵体,然后对包涵体进行复性,最终获得了具有生物活性的目的蛋白,并对其酶学性质以及抗菌活性进行了研究.超声破碎后获得了181.05 mg/L的重组蛋白包涵体,对包涵体进行复性后,比酶活力可达8 032.78 U/mg,其最适温度为35℃,最适pH为6.0,与其理论值基本一致,而其抗菌活性与标准品溶菌酶的作用效果也比较类似,为其规模化生产与进一步应用奠定了理论基础.