1株产顺式-4-羟基-L-脯氨酸基因工程菌的构建及发酵初步优化

摘要

顺式-4-羟基-L-脯氨酸是一种可用于合成多种药物和香料的手性结构物质.通过对L-脯氨酸顺式-4-羟化酶基因的优化设计,并引入色氨酸串联启动子,构建出1株能表达L-脯氨酸顺式-4-羟化酶的重组大肠杆菌JM109/pEHC4,从而可以将游离的L-脯氨酸转化为顺式-4-羟基-L-脯氨酸.对该菌株进行摇瓶发酵优化,得出优选培养基为(g/L):葡萄糖10,甘油10,蛋白胨10,NaCl 6,FeSO4·7H2O 0.278,L-抗坏血酸0.528,(NH4)2SO45,K2HPO41,MgSO40.2,CaCl20.015,L-脯氨酸4.在该条件下发酵12 h,顺式-4-羟基-L-脯氨酸的产量达到657.08mg/L,比优化前提高了3.76倍;在24 h时产量达到1 582.75 mg/L.研究结果为顺式-4-羟基-L-脯氨酸的微生物转化法生产提供了基础.