用N,N’-二乙基二硫代氨基甲酸酯为染色剂在聚丙烯酰胺凝胶中测定红细胞提取液中CuZn-超氧化物歧化酶

摘要

N,N′—二乙基二硫代氨基甲酸酯与CuZn—超氧化物歧化酶中的铜反应形成稳定的黄棕色带,可在448nm测定含量。这种超氧化物歧化酶(SOD)检验法已应用于红细胞裂解物的酶粗提物,裂解物中血红蛋白(Hb)可由氯仿——乙醇沉淀法去除。这种处理不影响测定裂解液中纯SOD活性和异质性,并可用同法测其回收。DDC对抽提液凝胶染色后的所显的带与二茴香胺阳性活性染色法显示的歧化酶活性带正好相对应,表明SOD是形成区带的唯一铜蛋白。通过标准歧化酶与待测物的峰面积比较可测定区带中SOD量,其结果与间接SOD活性测定的预测量相符。在DDC染色过程中,痕量Hb或Hb降解物在凝胶中产生的颜色过夜后可脱色。