重组超氧化物歧化酶1/3杂合酶在大肠杆菌中表达的优化

摘要

目的 获取活性高的重组SOD 1/3杂合酶.方法 用含pET-SOD 1/3的工程菌诱导表达重组SOD 1/3杂合酶,通过分析SDS-PAGE及SOD酶活性,考察诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度,Cu2,Zn2浓度对重组酶表达量和活性的影响.结果 正交试验表明,用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在A600=1.2时诱导,Cu2,Zn2浓度分别为2.4 mmol/L,诱导温度15℃,诱导时间12 h,能获得高活性重组SOD 1/3,其比活性为1 681 U/mg.结论 培养温度和Cu2、Zn2浓度是优化表达的最主要因素.降低诱导温度有利于重组酶的可溶性表达,添加Cu2、Zn2能促进重组酶活性提高.