孓遗植物桫椤RAPD分析中主要反应参数的影响

摘要

为得到桫椤RAPD扩增的最佳条件,对影响桫椤RAPD扩增的模板纯化方法、模板含量、酶浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和引物浓度及扩增程序等多种因素进行了探讨.结果表明,用玻璃奶和蛋白酶K纯化后获得的DNA作为模板进行RAPD反应,其扩增带比用未纯化的和仅用无水乙醇再沉淀的DNA为模板更亮,更清晰,重复性更好;模板浓度、酶浓度、Mg2+及dNTP浓度、引物浓度及退火温度这些因素都会对RAPD产生影响.经过本实验的探索,发现桫椤RAPD扩增的最佳体系是(2.5×10-2 mL反应体积):模板浓度为70 ng,Mg2+浓度为2.5 mmol@L-1,dNTP为0.2 mmol@L-1,引物3×10-4 mL;最佳扩增程序为:94℃200s,一个循环;94℃60s,36℃60s,72℃120s,40个循环;72℃600s,一个循环;4℃保存.