结核分枝杆菌抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的克隆表达及血清诊断学初步评价

摘要

目的 评价结核分枝杆菌蛋白抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的血清诊断价值和潜在应用前景.方法 以结核分枝杆菌H37Rv标准株全基因组DNA为模板扩增得到Rv2654c、Rv1985c和Rv3868基因的完整序列,并与表达载体pET-32a构建重组质粒.原核表达Rv2654c、Rv1985c和Rv3868蛋白,利用亲和层析的方法进行纯化.采用棋盘滴定的方法,确定各抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)最佳反应条件,并应用190份血清进行血清IgG抗体检测,结合受试者工作特征曲线(ROC)对其诊断效能进行分析和评价.通过ROC计算各抗原组合的诊断效能,确定最佳组合方案.结果 成功构建了重组蛋白,对重组后的片段进行测序,经BLAST比对与目的基因完全一致,且能够稳定表达.对经纯化后的3种蛋白进行ELISA检测,经统计学分析,Rv2654c、Rv1985c和Rv3868抗原的诊断效能分别达到73.16％、56.84％和71.05％.结合ROC得到最佳的抗原组合方案为Rv2654c+ Rv3868,其敏感性、特异性和诊断效能分别达到78.95％、72.63％和75.79％.结论 结核分枝杆菌重组抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868具有作为结核病诊断抗原的潜力,可以作为结核病免疫学快速诊断的候选蛋白.抗原组合Rv2654c+ Rv3868具有较高的诊断效能,有较好的潜在应用价值.