肽配基仿生亲和介质的制备和抗体纯化性能研究

摘要

寻找选择性高、稳定性强、价格低廉的蛋白A替代配基是抗体分离纯化领域的研究热点.针对L型氨基酸组成的线性多肽配基易被酶降解的问题,以D型非天然氨基酸为原料合成了配基D-FYWHCLDE,通过将游离的多肽配基与α-糜蛋白酶共同孵育研究了多肽配基的酶稳定性.通过将多肽配基偶联到Sepharose 6FF基质上制备了用以分离纯化抗体的多肽亲和介质,以细胞培养上清液和人血清为实际分离体系,考察了仿生多肽亲和介质的分离效果,通过测定多次从人血清中纯化hIgG及用0.1 mol/L NaOH长时间原位清洗后多肽亲和介质的动态吸附容量(DBC)变化来考察多肽亲和介质的可重复利用性和稳定性.结果表明,与酶共同孵育8 h后,D型多肽配基的降解率(8%)远低于L型多肽配基(55%),说明D型多肽配基具有更高的酶稳定性.使用D型多肽亲和介质从细胞培养上清液中纯化的单克隆抗体(mAb)的纯度高达98%,从人血清中纯化hIgG纯度为91.37%,说明多肽亲和介质具有从复杂的实际体系中分离抗体的能力,但不具备分离抗体不同亚型的能力.经0.1 mol/L NaOH原位清洗12 h后,两种多肽亲和介质对抗体的吸附量下降均小于8%,以人血清为原料,经过40次上样后,L型多肽亲和介质DBC下降14.51%,而D型多肽亲和介质仅下降5.92%,表明D型多肽亲和介质具有更高的操作稳定性.