下调Caveolin-1对紫外线照射下人皮肤成纤维细胞的影响及机制

摘要

目的探讨利用小干扰RNA(siRNA)抑制小窝蛋白1(Caveolin-1)表达对紫外线照射下人皮肤成纤维细胞(HSF细胞)的影响及机制。方法利用长波紫外线(UVA)照射HSF细胞,通过脂质体介导siRNA转染抑制HSF细胞中Caveolin-1表达。将HSF细胞随机分为4组并进行处理:Control组(正常HSF细胞)、siRNA-Cav-1组(转染siRNA-Caveolin-1质粒)、UVA组(20 J/cm^(2) UVA照射48 h)及siRNA-Cav-1+UVA组(转染siRNA-Caveolin-1质粒,再经20 J/cm^(2) UVA照射48 h)。实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞中Caveolin-1的mRNA与蛋白表达;MTT法检测细胞存活率;DCFH-DA染色检测细胞内活性氧(ROS)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;β半乳糖苷酶(SA-β-GAL)染色法观察细胞衰老情况;Western blot检测衰老相关蛋白p16、p21、p53及p38 MAPK、P-p38 MAPK的表达。结果经过UVA处理的HSF细胞中Caveolin-1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量上升(P<0.05),细胞存活率下降(P<0.05),ROS水平增加(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),SA-β-GAL染色呈强阳性,衰老细胞所占比例增加(P<0.05),p16、p21、p53蛋白表达以及p38 MAPK磷酸化水平均上调(P<0.05);而与UVA组比较,转染siRNA-Caveolin-1质粒再UVA照射的细胞中Caveolin-1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均下降(P<0.05),细胞存活率升高(P<0.05),ROS水平有所下降(P<0.05),细胞凋亡率减少(P<0.05),SA-β-GAL染色变浅,衰老细胞所占比例减少(P<0.05);同时,p16、p21、p53蛋白表达以及p38 MAPK磷酸化水平均下调(P<0.05)。结论下调Caveolin-1可逆转UVA照射下人皮肤成纤维细胞的老化,其机制与降低ROS水平、抑制p38 MAPK信号通路有关。