SIRT1通过调控TET2促进小于胎龄儿下丘脑中星形胶质细胞分化

摘要

目的研究在小于胎龄儿下丘脑中,SIRT1是否通过调控TET2表达影响GFAP的DNA甲基化水平,最终促进星形胶质细胞分化。方法将12只SPF级SD孕大鼠,自孕第一天起随机分为对照组和SGA组,对照组繁殖饲料喂养,不限饮食直至自然分娩,SGA组8%低蛋白饲料喂养,自孕10天起50%限制饮食(以对照组前一天饮食平均量为标准),直至自然分娩。取两组出生第一天子鼠的下丘脑组织,双重免疫荧光染色观察GFAP、Tuj1的表达与分布,Western blot法和RT-PCR法检测新生鼠下丘脑组织中SIRT1、TET2、GFAP蛋白及mRNA表达,用焦磷酸测序测定GFAP启动子区域的DNA甲基化水平。体外培养SGA组和对照组子鼠的下丘脑神经前体细胞,分别用SIRT1激活剂和抑制剂对细胞进行处理,Western blot和RT-PCR法检测不同干预下SIRT1、TET2、GFAP蛋白及mRNA表达,用焦磷酸测序测定不同干预后GFAP启动子区域的DNA甲基化水平。结果与对照组相比,SGA组下丘脑中SIRT1、TET2、GFAP表达增加,GFAP启动子区域的甲基化水平降低,双重免疫荧光染色结果显示,SGA组的GFAP分布增多,Tuj1分布减少。体外神经细胞培养证实,抑制SIRT1的表达,降低了TET2、GFAP的活性,增加了GFAP启动子区域的甲基化水平;反之,SIRT1的激活会增加TET2、GFAP的表达,降低GFAP启动子区域的甲基化水平。结论在小于胎龄儿的下丘脑神经前体细胞中,SIRT1可能通过增强TET2的活性,继而改变GFAP启动子区域的甲基化水平,促进神经前体细胞向星形胶质细胞的分化。