共培养诱导骨髓来源成体祖细胞向软骨细胞分化的研究

摘要

目的观察犬骨髓来源成体祖细胞(MAPC)与软骨细胞共培养后其向软骨细胞定向分化的情况。方法采用全骨髓直接接种法体外培养犬MAPC,观察形态学特征、生长情况及活细胞数,绘制生长曲线,流式细胞仪检测SSEA-1、CD13、CD44、CD45、CD133、MHCⅡ表达率。采用软骨培育法原代培养兔软骨细胞并鉴定。实验组及对照组分别采用软骨细胞及培养基与MAPC在Transwell小室共培养,观察2组MAPC分化为软骨细胞的百分率,RT-PCR检测聚集蛋白多糖和Ⅱ型胶原mRNA含量,组间比较采用单因素方差分析。结果 MAPC原代培养呈多角形,8 d后呈克隆样生长,形态呈长条形或梭形;生长曲线显示MAPC接种1 d后开始增殖,6 d达到高峰,随后进入平台期;流式细胞仪检测结果显示细胞表面SSEA-1和CD13阳性,CD44、CD45、CD133、MHCⅡ阴性;实验组及对照组Ⅱ型胶原抗体阳性细胞比例分别为(26.1±4.5)%,对照组为(7.2±2.2)%,差异有统计学意义(P<0.05),RT-PCR显示实验组聚集蛋白多糖和Ⅱ型胶原mRNA含量分别为6.61±0.34、8.37±0.79,显著高于对照组1.46±0.51、2.14±0.48(P<0.05)。结论 MAPC与软骨细胞共培养可诱导其向软骨细胞分化。