人表皮细胞生长因子基因真核表达质粒转染培养的角朊细胞

摘要

目的：探讨外源性基因真核表达的机理及角朊细胞作为基因治疗靶细胞的可能性。方法：选用已构建的ｐＢＫ－ＳｉｇｎａｌＥＧＦ质粒，在脂质体ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ的介导下转染培养成７０％～８０％连片的人角朊细胞；采用逆转录ＰＣＲ方法检测外源性基因的转录水平；通过表皮细胞生长因子放免测定法检测外源性基因的翻译水平。结果：（１）外源性人表皮细胞生长因子（ｈＥＧＦ）基因转染角朊细胞后有转录表达；（２）外源性ｈＥＧＦ基因转染角朊细胞后有ＥＧＦ蛋白分泌，以基因转染后４８ｈ分泌水平最高，约２～３ｎｇ／ｍｌ。结论：ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ介导ｐＢＫ－Ｓｉｇｎａｌ－ＥＧＦ质粒转染角朊细胞可获得瞬时表达的ＥＧＦ蛋白。