重组型Caspase-3基因的构建及其在胰腺癌细胞中凋亡活性的观察

摘要

目的　通过对半胱氨酸蛋白酶 3 (Caspase 3 )大、小亚基的重组 ,构建pcDNA3 .1(+ ) /r Caspase 3真核表达质粒 ,并探讨r Caspase 3基因诱导细胞凋亡的可能性 ,以寻求肿瘤基因治疗的新途径。 方法　采用分子生物学方法克隆Caspase 3的大、小亚基 ,并在体外进行重新排列组合 ,使大、小亚基原来的排序颠倒 ,构建出pcDNA3 .1(+ ) /r Caspase 3真核表达质粒 ;脂质体瞬时转染人胰腺癌细胞PC Ⅱ ,RT PCR检测r Caspase 3mRNA的表达 ;流式细胞技术 (FCM )检测转染胰腺癌细胞凋亡状况。结果　Caspase 3的大、小亚基被完整克隆 ,pcDNA3 .1(+ ) /r Caspase 3真核表达质粒测序结果证实小亚基位于大亚基之前 ;RT PCR扩增出 894bp大小片段 ,流式细胞检测可见明显的凋亡峰出现。 结论　构建的r Caspase 3其mRNA可在胰腺癌细胞中表达并自催化诱导细胞凋亡 ,可作为胰腺癌基因治疗的目的基因。