表达猪流行性腹泻病毒S基因片段重组腺病毒的构建与免疫特性

摘要

利用RT-PCR、同源重组等技术构建了含有猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因上3个片段的重组腺病毒质粒pAd-S498～638,pAd-S1～638,pAd-S498～1384,经PacI酶切后转染HEK-293A细胞,3次噬斑纯化分别获得了重组腺病毒rAd-S498～638,rAd-S1～638,rAd-S498～1384。重组腺病毒于HEK-293A细胞连续传代至20代效价稳定,TCID50分别为每毫升10-6.29、10-5.75、10-6.5。应用猪流行性腹泻病毒阳性血清进行间接免疫荧光抗体试验,在3个腺病毒感染的HEK-293A细胞的胞质见有清晰荧光。将3个重组腺病毒分别免疫小鼠,结果均诱导产生较强的体液免疫应答。结果表明这3个重组腺病毒对S基因的3个片段均可成功表达,并具有较好的免疫原性,为PEDV重组腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。