猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白5'端基因重组腺病毒的构建及其免疫特性

摘要

RT-PCR扩增出猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S蛋白基因5'端包含B、C抗原位点的1.0 kb DNA片段,并与穿梭载体pShuttle-CMV连接;然后与腺病毒(Adenovirus)骨架载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌(Es-cherichia coli)BJ5183,通过同源重组获得重组腺病毒质粒.该重组腺病毒质粒转染HEK293细胞并进行噬斑纯化,获得了1株含有TGEV S蛋白5'端基因的重组人复制缺陷型血清5型腺病毒rAd-TGEV-S.随后用RT-PCR和间接免疫荧光(indirectimmunofluorescent assay,IFA)检测目的基因的转录与表达.重组腺病毒rAd-TGEV-S在HEK293细胞连续传代9次后,病毒效价稳定,滴度平均为107.7TCID50/mL.动物免疫试验显示,tad-TGEV-S可以诱导小鼠产生TGEV特异性IgG和IgA.